1.概述

鸡毒支原体感染(MGI)，通常被称为鸡败血性霉形体感染或鸡慢性呼吸道病（CRD），在火鸡则成为传染性窦炎，临床上以呼吸道症状为主，特征表现为咳嗽、流鼻液、呼吸道罗音，严重时呼吸困难和张口呼吸。该病发展缓慢且病程长，并常与其他病毒或细菌混合感染，剖检时可见鼻窦和气管有卡他性渗出物以及严重的气囊炎，感染此病幼鸡发育迟缓，饲料报酬率低，产蛋鸡产蛋下降，病原可在鸡群中长期存在和蔓延，并可通过蛋传播给下一代[1]。 本病泛分布世界各地，随着养鸡业集约化程度的提高，饲养方式的改变以及饲养密度的提高，在通风不良、空气中氨和灰尘增加或气温骤降等环境中，容易发生本病。并能与大肠杆菌和/或病毒合并继发感染，甚至接种鸡新城疫和传染性支气管炎等活疫苗后也可诱发本病，目前该病已成为集约化养鸡场的重要传染病，严重影响着养鸡业的健康发展，给养禽业造成重大经济损失[2,3]。据统计，MG感染后，雏鸡的弱雏率增加10%左右，蛋鸡的产蛋率下降10%～20%，肉鸡的体重减少38%。我国鸡的MG感染阳性率为50%～80%[4]。

2.病原学

支原体(Mycoplasma)、无细胞壁，能自我繁殖，是介于细菌和病毒之间的最小的单细胞原核微生物。目前发现的支原体有200多种，广泛分布于生物界，大部分有致病性。禽类支原体有25种，能够引起重大病变的鸡源支原体主要有三种:鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum, MG)、滑液支原体(Mycoplasmasynoviae, MS)和火鸡支原体(Mycoplasma meleagridis, MM)，其中以MG感染鸡导致的慢性呼吸道病(chronic respiratory disease, CRD)和感染火鸡引起的传染性窦炎最为普遍，对家禽生产的危害最为严重[5]。

鸡毒支原体（MG），其大小为250～500nm，能通过 450nm的细菌滤器，形态不一，呈高度多形性，常见的有球状、丝状，还有杆状、环状、螺旋状等不规则形态。姬姆萨染色着色良好，革兰氏染色阴性，着色较淡。MG 可吸附鸡、火鸡和仓鼠等动物的红细胞，这是与非致病性禽源支原体的主要区别[6]。MG为需氧或兼性厌氧菌；在人工培养时对营养要求较高，需要在培养基中加入10%～15%的灭活猪或马血清、胰酶水解物和酵母浸出物才能生长。在固体培养基上，需置潮湿的环境中培养3～10d才能形成表面光泽透明、边缘整齐、露滴样的小菌落，且菌落为“煎蛋样”[7]，菌落很小，最大不超过1mm，肉眼不可见，光学显微镜下可清楚观察到菌落形态[8]。

MG能发酵葡萄糖和麦芽糖、产酸不产气、不发酵乳糖、卫茅醇或水杨甙、不水解精氨酸、可还原四氮唑（变红）和四唑蓝（变蓝），对毛地黄皂甙敏感。MG 对理化因素的抵抗力不强，对紫外线敏感，阳光直射便迅速丧失活力，一般常用的化学消毒剂均能迅速将其杀死；50℃约20min即可将其灭活，在沸水中立刻死亡。液体培养物在4℃保存不超过1个月，在-30℃中可保存1～2年。MG对链霉素、四环素族、氯霉素、红霉素、泰乐菌素敏感，但也易产生耐药性[9]。

3.临床症状与剖检变化

MG单独感染时临床症状较轻，感染鸡偶有夜间咳嗽，不影响鸡的食欲和精神状态。但是MG极易和其他病原混合感染，症状明显:病鸡咳嗽、流鼻涕、流泪、呼吸时发出湿罗音，死亡率高。

3.1 MG与新城疫病毒混合感染 采食量下降，部分鸡明显发呆，闭眼昏睡，发出“呼噜”音，拉黄白或黄绿色稀便。剖检可见肝脏略显肿大、充血；有的腺胃乳头出血，大部分潮红

且有淡黄色液体渗出，肌胃内容物发绿，个别肌胃角质膜下有针尖状出血;整个肠道淋巴滤泡肿胀，十二指肠出血，盲肠扁桃体出血，直肠条状出血；心冠脂肪有针尖状出血点；气囊浑浊，个别有黄色干酪样物;气管、支气管潮红，气管内有淡黄色黏液;鼻腔内有少量黏液。

3.2 MG和大肠杆菌混合感染 精神不振、呼吸湿罗音、甩鼻、咳嗽，倒提从口鼻中流出粘液；有的鸡 只出现关节炎，跗关节、趾关节肿大，关节腔中有浑浊的关节液；部分鸡只结膜红肿有渗出物，眼球凸出，甚至失明。剖检可见气管粘膜增厚、充血、出血，气囊膜浑浊、增厚、有干酪样渗出物，肺脏发生炎性实变，同时伴有典型的心包炎、肝周炎。

4.鸡毒支原体的危害

MG主要感染鸡和火鸡，临床表现为喘气，咳嗽，流装液性鼻液和气囊炎。各日龄的鸡或火鸡均可常年感染MG，以4-8周龄的鸡最易感，造成的危害也最大。CRD是一种接触性传染病，水平和垂直传播并存，一旦进入鸡场，在鸡场中长期蔓延，很难净化[10]。本病易复发，且常与其他疾病如传染性鼻炎、大肠杆菌病、传染性支气管炎等并发或继发感染。随着养鸡业集约化程度的提高，管理不善、气温骤变以及免疫接种等因素均可促进MG隐性感染鸡发病或引起MG的感染。目前CRD广泛流行于世界上所有的养禽国家。鸡群单独感染MG后大多呈现亚临床感染，死亡率在10%以下，当与其它病原微生物混合或继发感染时，会加重本病的发生，并造成严重的病理损伤，死亡率提高到30%以上。感染MG后可造成肉鸡的体重减少38%，均匀度下降，出栏期延长，饲料转化率降低21%；雏鸡的弱雏率增加10%；蛋鸡的产蛋率下降10%-20%，畸形蛋增多，种蛋的受精率和孵化率下降10-20%。据调查我国鸡群MG的平均感染率为78.5%；美国大部分鸡群的平均感染率为50%，有的鸡群高达70%-90% (Hess,2007)。每年CRD给养鸡业都造成巨大的经济损失，所以它已成为当前危害养鸡业发展的重要传染病之一。此外，鸡毒支原体具有显著改变表面抗原的能力[11,12]，并通过抗原性变异来逃避宿主的免疫系统[13,14]，因此给兽医临床养殖场支原体病的防控带来极大困难。

5.鸡毒支原体的致病机理

支原体的膜表面含有多种丰富的脂质相关膜蛋白(lipid-associated membrane proteins, LAMPs)，该膜蛋白可能是介导支原体黏附，侵入宿主细胞而参与细胞损伤与死亡的基础[15]。一些支原体能通过LAMPs的介导粘附到宿主细胞的表面，且其毒性很大程度上取决于LAMPS。鸡感染MG的病理变化主要是气管和支气管黏膜上皮细胞坏死脱落。Markham(1991)研究证实，MG进入鸡体后，首先通过细胞表面的點附蛋白(protein of Mycoplasma gallisepticum adhesion, pMGA)吸附于宿主呼吸道點膜相应的受体上，然后在局部大量繁殖，造成病理损伤。毕丁仁等(1999)通过扫描电镜观察发现气管纤毛上皮细胞脱落是最明显的病变之一。鼻腔中可呈现鼻炎和眶下窦炎，有黄白色干酪样渗出物，點膜红肿，粘液分泌增多，肺部有可见灰白色细小病变。显微镜下观察肺内可见大量的异嗜性和单核细胞浸润[16]。闻人楚等(2000)通过MG感染离体培养鸡胚气管环发现，在光学显微镜下气管环纤毛运动逐渐丧失，纤毛运动的时间和未感染对照组相比明显缩短，扫描电镜观察发现气管环的上皮细胞剥离、纤毛脱落，同时发现有MG残存于纤毛的顶端。这一实验说明了MG在感染气管后主要作用于纤毛细胞，造成纤毛细胞病变。

大量的研究证明家禽感染MG后，免疫器官内T淋巴细胞、B细胞和单核巨嗟细胞显著活化增殖，但B细胞和单核巨唾细胞的增殖程度较T细胞差，且持续时间短。家禽感染鸡毒支原体后，体内可以产生较高水平的抗体，但免疫力与抗体水平的关系不大。实验证明，给鸡注射大剂量MG抗体不能抵抗MG强毒对气囊的攻击，带有母源抗体的雏鸡对MG强毒仍易感，因此许多人认为MG的免疫机理是以T细胞介导的细胞免疫为主定了法氏囊对MG的抵抗力与血清学反应的重要性，他们发现伴有并发感染的鸡支气管洗液中MG抗体效价上升可降低微生物含量和支气管的病变;康复鸡体内抗体一直存在，再次发病时，比初次暴发CRD后所观察的MG消除速度要快，支气管病变严重程度要比初次轻。这些结果表明，呼吸道分泌的抗体在抗MG感染中起着重要作用;呼吸道产生的相应的MG的抗体能阻止MG在支气管上皮细胞上附着，可能是免疫介导保护的一个重要机理。因此可以说MG感染的免疫是T细胞介导的细胞免疫、局部的黏膜免疫和单核巨唆细胞也积极参与的联合免疫(Youder H Wetal, 1986)。MG除了通过抑制或刺激T、B淋巴细胞来影响细胞免疫外，还可以刺激一些细胞因力的产生，Reddy等[18]发现MG感染鸡的外周血白细胞在体外经抗原剌激后可检测到淋巴细胞增殖、干扰素及一氧化氮等。此外，支原体与各类宿主细胞间作用的同时能产生广泛的异常免疫反应，包括激活巨唾细胞、T细胞、B淋巴细胞及NK细胞的溶细胞活力，并刺激免疫活性细胞产生某些细胞炎性因子造成组织炎症损伤。

6.诊断

血清学方法是临床诊断MG感染应用最普遍的方法，血清学试验呈阳性者，结合临床症状就可以在MG分离和鉴定之前作出初步诊断。用于检测MG的血清学试验很多，但都不同程度的缺乏特异性和敏感性。分子生物学方法也常用于MG的感染。

6.1病原体的分离和鉴定

分离病原体适用的培养基有人工培养基(FM24培养基和PPLO培养基)、鸡胚、组织培养物(鸡肾细胞培养物和鸡气管培养物)。病料为可疑感染鸡的气管或气囊的渗出液、肺的悬浮液或鼻窦的渗出液，均可选择上述培养基进行分离培养，同时还需结合血清学方法来确定。此法工作量大，耗费时间长，不适合于生产上的快速诊断和监测[19]。

6.2血清学方法

生产上多用血清学方法结合病史和临床症状来诊断MG感染。常用的血清学方法有血清平板凝集试验(SPA)、血凝抑制试验(HI)、酶联免疫吸附试验(ELISA)[17]和斑点酶联免疫吸附试验(Dot2ELISA)等，该方法可用于检测卵和血清中的MG抗体[20]，也有人利用该方法检测MG抗原[21]。SPA是应用最广泛的群体检测方法之一，具有结果清楚、易观察、操作简单、快速敏感、重复性好等优点，但存在非特异交叉反应。该法也可检测卵黄中的MG抗体，但用不同方法处理的卵黄液检测结果不同。阚保东等(1992)应用本法分别对卵黄原液、盐水卵黄液(1∶1)、氯仿卵黄液进行MG抗体的监测，结果表明，用氯仿提取的卵黄液更适合于MG的凝集试验，敏感性高，特异性强。而盐水卵黄液会出现假阳性，卵黄原液中没有检测到MG抗体。HI具有特异准确的优点，可以进一步证实SPA检测的结果，但敏感性较差，操作烦琐。20世纪60年代，罗清生根据Crawley的试验结果，报道了诊断MG只需将血清作1:5倍稀释进行HI的简易操作技术。赵化民等(1998)又对简易HI技术进行了研究，结果表明简易HI技术操作程序简单、快速，一块96孔反应板，一般可检测48份血清样品(双孔加样法)与传统HI技术相比，提高效率5～6倍，更适合现地、海关、基层单位应用。Talking tou等(1985)建立了检测MG抗体的ELISA方法，该法较SPA敏感性稍低，但特异性强。而后Opitz等(1986)在ELISA中应用经Triton2100溶解的MG和MS抗原，结果表明此抗原比使用其他类型的抗原具有更高的特异性和敏感性。Ewing等(1996)应用ELISA检测了血清、蛋黄中的MG抗体。王乐元等(1994)应用Dot2ELISA检测MG抗原，为MG感染的早期诊断和进行流行病学调查提供了依据。郭建华等(1998)应用Dot2ELISA检测MG血清抗体，结果表明该法的敏感性是HI的40倍以上，且特异性很高，适合大规模血清抗体的监测。

6.3分子生物学方法

主要包括核酸探针和PCR方法，敏感性和特异性均较血清学方法高，并且可用于MG和MS的鉴别诊断。Levisohn等(1989)克隆到一个60kb片段，并用32P标记制成探针检测人工感染鸡，一周后在气管拭子中可检测出MG，并证明该方法比血清学方法更可靠，比分离培养法要快得多，可用于MG早期感染的检测。该探针对MG各菌株具有广谱识别作用，而与MS等其它霉形体无交叉反应，张伟等(1993)构建了MG2S6株DNA文库并制备了种特异性生物素标记的DNA探针。王玫等(1996)用生物素标记的DNA探针检测MG，灵敏度达10ng。Kempf等(1993)建立了检测MG的PCR方法，其较核酸探针法更敏感，需要时间短。在PCR方法的基础上，Fan(1995)建立了随 机引物PCR(AP2PCR)法，可用于检测种内株的差异。目前已经制备出了鸡毒支原体的种DNA探针和某些株的DNA探针，并且有多家公司开发出商品化的PCR试剂盒[22]。

7.防制措施

控制该病的发生和流行，必须坚持预防为主、加强管理、综合防制的原则。单纯依靠药物或疫苗都是片面的观点。药物、疫苗、管理3者密切结合，才是防制本病的最根本措施。

7.1 药物预防

抗生素治疗效果比较好的有泰乐菌素、泰妙菌素、强力霉素，其次是利高霉素、壮观霉素、林肯霉素、螺旋霉素、金霉素、土霉素，链霉素和庆大霉素也有一定的治疗作用，而红霉素尽管在体外对MG抑菌作用很强，但是体内基本上没有作用，用量过大易使小鸡出现副反应。由于生产中，频繁使用大量抗生素药物，所以MG对抗生素敏感性降低。有些MG菌株对链霉素、泰乐菌素、庆大霉素有很强的耐受性，宁宜宝等将从鸡胚中分离出的11个菌株进行了药敏试验，其中9个菌株对链霉素的耐受性达到1000微克/ml，2个在250微克/ml，高出对照株的250倍以上，对泰乐菌素、庆大霉素的耐受性也高于对照株。抗生素在MG的治疗上主要用药途径是饮水、拌料和注射，而以前两者常用，用以上这些药物按500mg/kg投入饮水中，连饮5d，会达到治疗和缓解病情的作用，但这些药物均不能彻底根治。试验结果表明，在人工感染的鸡群中，经过治疗后仍有部分鸡呈现血清学阳性反应和出现气囊病理损伤，一旦停药还可复发。由于治疗MG病的药物在价格上都较贵，加之治疗效果问题，所以治疗费用能否得到更大的回报是值得怀疑的。使用喹诺酮类药物在MG病的治疗方面效果优于各种抗生素[23]，但这些药物也不能彻底根治此病，一旦停药，同样可以复发。由于药物的费用问题，一般情况只适用于雏鸡的预防、治疗和成鸡的紧急治疗。

7.2疫苗预防

研制新型的切实有效的疫苗是防制MG病的重要手段，也是绿色畜产品的发展趋势，但目前生产的大部分疫苗都处于较低级或者说是广谱预防的阶段，特异性不强，对鸡场MG的保护率只能达70%～80%，最高只能达到90%。

7.2.1活苗

活苗研究始于20世纪70年代，国内使用的活疫苗为MG康涅狄克F株疫苗，其致病力极弱，给1、3、20日龄的雏鸡滴眼接种，不会引起任何可见的症状和气囊病变，不影响增重。活苗研究中，日本、法国、美国分别将G-50株、CP株、F株、TS-11株及6/85株制成疫苗应用，其中G-50株、CP株由于毒力极度减弱，需频繁使用，效果不佳。F株比野毒株致病性低，在鸡产蛋之前和被MG野毒感染前使用可降低商品蛋鸡的产蛋损失，减少病原体经卵传递。MG弱毒常具有置换和传播功能，F株可通过置换强毒而使感染鸡得到保护，但F株仍有一定毒力，特别对于火鸡，它可以引起商品火鸡感染发病。新近的研究结果表明，TS-11和6/85弱毒制作的疫苗比F株毒力更弱，对鸡和火鸡均无毒力[24]，疫苗对未受MG感染的鸡有较好的免疫效果，也可用于火鸡的免疫接种，但免疫鸡体内检测不到抗体，不易判断免疫效果，对已感染MG的鸡群接种效果不如F株。Tuner等(1996)的研究结果表明，在集约化饲养的条件下，用TS-11已成功的根除MG。因此，近年来TS-11株和MG6/85更多

的被作为商品化弱毒苗用于鸡和火鸡。中国兽药监察所用弱毒株F-36制成的活疫苗免疫接种鸡，不影响鸡体增重，不引起气囊损伤，接种鸡不表现任何临床症状。该疫苗接种鸡，免疫保护率达80%，免疫期可达9个月[25]。

7.2.2灭活疫苗

20世纪50年代开始，许多禽病工作者即从事灭活苗研究，但效果不佳。Yoder等(1984)报道以MG油乳剂灭活苗对15～30日龄鸡免疫接种能有效地抵抗强毒株攻击，但用于10日龄内的雏鸡，免疫效果不理想。Stone(1987)报道了1种改良的油佐剂苗，可使雏鸡免受鼻内接种强毒的攻击，保护产蛋鸡群，不造成产蛋率下降，防止鸡的气囊病但不能完全阻止MG在气囊和肺内定殖[26,27]。宋勤叶等(1999)用MG油乳剂灭活苗接种蛋鸡，结果表明无论在试验攻毒前还是在攻毒后接种，均能有效地降低MG的蛋传率。Abd2Ei2Motelib等(1993)曾对F、TS-11和6/853个弱毒株以及1个商业性灭活苗就其免疫效力进行了比较，疫苗接种鸡在致病菌株R株气溶胶攻击之后，各组剖检28只鸡检查气囊病理损伤结果，F株免疫组只有5只有极其轻度的损伤，损伤平均分为0.18，其它3种疫苗接种鸡出现气囊损伤平均分为1.21～1.89，而灭活疫苗接种组与未接种疫苗的对照组相差无几，均明显不如F株。我国鸡场中MG感染普遍，预防控制难度很大，因此必须根据我国的实际情况，加强对该病危害性的认识，采取以疫苗接种为主、药物治疗为辅、加强饲养管理及环境净化控制的综合防治措施，使该病早日得到有效控制。

7.3管理预防

应激因素对本病的影响很大，管理不善、饲料营养缺乏、禽舍内通风不良、空气污浊以及气候骤变等应激因素，均可导致MG感染或

7.3.1 控制水平传播 控制MG感染首先要做好建立无病群的工作。要达到这一目标，首先鸡场要有合理的布局，良好的隔离和防疫、消毒制度以及好的饲养环境;要采用全进全出的饲养模式;要严格控制人员流动等。

7.3.2 鸡群净化 MG阴性群在鸡4月龄时抽检10%以上，以后每隔90d抽检5%以上。检测方法用PA、HI、ELISA或PCR等，蛋鸡可取鸡蛋黄以生理盐水稀释后测定；MG阳性种鸡净化则需间隔1～2周检测一次，通过连续检测淘汰病鸡[28]。

7.3.3 种蛋处理 对种蛋进行处理是控制MG垂直传播的有效措施。将种蛋加热至37.8℃，然后突然浸入冷的抗素溶液(400～1000mg/L的泰乐菌素等)中15～30min，抗生素可透过蛋壳膜进入蛋内，杀死MG。中国兽药监察所研究出的以45℃、14h连续处理种蛋，可杀灭人工感染和经卵传播的支原体，可基本上切断垂直传播这一途径[29]，培养出无支原体感染的健康鸡群[30]。

参考文献：

[1]王永明，刘娟，王晓丽，章刚.鸡毒支原体病原学及疫苗的研究进展[J].兽医导刊，2010年第12期.

[2]宁宜宝.鸡群健康的潜在杀手―鸡毒支原体病的防制.中国兽医杂志，2003，39(10): 44-46. Ning Y B. Potential threat to the health of chicken herd―prevention and control of Mycoplasma gallisepticum infection. Journal of Chinese Veterinary Medicine， 2003， 39(10): 44-46. (in Chinese)

 [3]Hudson P, Gorton T S, Papazisi L, Cecchini K, Frasca S, Geary S J.Identification of a virulence-associated determinant, dihydrolipoamide dehydrogenase (lpd), in Mycoplasma gallisepticum through in vivo screening of transposon mutants. Infection and Immunity, 2006，74:931-939.

[4]宁宜宝.动物支原体病预防与控制的研究进展[J].中国兽医杂志，1999，33(1):45～48。

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