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了解病毒感染力测定的几种常用方法，掌握半数细胞培养物感染量TCID50的操作步骤、计算方法及含义。
一、测定病毒感染力的常用方法
测定病毒感染力的常用方法有四种：半数致死量LD50(50% lethal dose)：用动物或鸡胚来检测；半数鸡胚感染量EID50(egg50%
infective dose)：用鸡胚来检测；半数细胞培养物感染量TCID50（50% tissueculture infective dose)：用细胞来检测；蚀斑形成单位（plaqueforming unit，PFU）：用细胞来检测。本文主要介绍半数细胞培养物感染量（TCID50）的测定方法
二、材料
1、长满单层的细胞1瓶
2、胰酶、吸球、吸管、生长液
3、96孔细胞培养板
4、加样器、枪头
5、病毒液（PRV）
三、TCID50的操作步骤
1、在离心管中用MEM将病毒液作连续10倍的稀释，从10-1-10-6。
2、将稀释好的病毒接种到96孔培养板中，每一稀释度接种一纵排，共8 孔，每孔接种100µl。
3、在每孔加入细胞悬液100µl，使细胞量达到2~3×105个/ml。
4、设正常细胞对照，正常细胞对照作两纵排。（100µl生长液+100µl细胞悬液）
5、逐日观察并记录结果，一般需要观察5-7天。
6、结果的计算，按Reed-Muench两氏法或Karber法。
四、TCID50的计算方法
1、Reed-Muench两氏法
距离比＝（高于50%病变率的百分数-50%）/（高于50%病变率的百分数-低于50%病变率的百分数）
＝（91.6-50）/（91.6-40）
＝ 0.8
lgTCID50=距离比例×稀释度对数之间的差+高于50%病变率的稀释度的对数
=0.8×(-1)+(-3)
=-3.8
TCID50=10-3.8/0.1ml
含义：将该病毒稀释103.8接种100µl可使50%的细胞发生病变。
2、Karber法
L：最高稀释度的对数
D：稀释度对数之间的差
S：阳性孔比率总和
lgTCID50=-1-1×(3.375-0.5)
=-3.875
TCID50=10-3.875/0.1ml
含义：将该病毒稀释103.875接种100µl可使50%的细胞发生病变。
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